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    細胞培養的注意事項

    發(fā)布時(shí)間: 2022-02-28  點(diǎn)擊次數: 992次
    01

    冷凍管應如何解凍? 


    取出冷凍管后,須立即放入37 C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預防冷凍管之爆裂。





    02

    細胞冷凍管解凍培養時(shí),是否應馬上去除DMSO?

    除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分貼壁細胞株,在解凍之后,應直接放入含有12-16ml新鮮培養基之培養角瓶中,待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可,懸浮細胞可先離心去掉DMSO,如此可避免大部分解凍后細胞無(wú)法生長(cháng)或貼附之問(wèn)題。





    03

    可否使用不一樣的培養基培養同一個(gè)細胞呢?

    不能。每一個(gè)細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無(wú)法立即適應,造成細胞無(wú)法存活或者老化空泡現象,如一定要替換,建議馴化,按照血清的馴化方式操作即可。







    04

    可否使用不同品牌的血清進(jìn)行細胞培養呢?

    需要按比例馴化,新舊血清比為:3:2,1:2,1:3直到*更替。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源,所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。









    05

    培養細胞時(shí)應使用5 %或10% CO2?或根本沒(méi)有影響?

    一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時(shí)應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí),細胞培養時(shí)應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí),則應使用5% CO2培養細胞。





    06

    何時(shí)需更換培養基?

    視細胞生長(cháng)密度而定,整體50%以下2-3天更換一次培養基,整體密度50%以上一天更換一次或遵照細胞株基本數據上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養基即可。



                                                             


    07

    附著(zhù)性細胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA濃度?應如何處理?

    一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于–20 C,避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機會(huì )。





    08

    懸浮性細胞應如何傳代處理?

    一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時(shí),可將培養角瓶口端稍微抬高,直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部分含細胞之培養液至另一新的培養角瓶,加入新鮮培養基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。





    09

    貼壁細胞如何傳代處理? 

    依照細胞株基本數據和細胞的生長(cháng)情況傳代,若第一次接種不了解細胞的基本特征,建議1:2傳代,后續觀(guān)察細胞特點(diǎn),若1-2天即可達到密度80%以上建議1:3或以上。傳代的時(shí)候請注意:細胞數太少或稀釋得太多亦是造成細胞無(wú)法生長(cháng)之一重要原因。





    10

    欲將一般動(dòng)物細胞離心下來(lái),其離心速率應為多少轉速?

    欲回收動(dòng)物細胞,其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10分鐘,過(guò)高之轉速,將造成細胞死亡。



    細胞培養注意以上操作,有事半功倍的效果哦



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